Slovenský hematolologický portál - KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ D-DIMERU

KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ D-DIMERŮ A JEJICH VÝZNAM PRO KLINICKOU PRAXI

Hejduková M., Hirmerová J., Martínková I., Vykoupilová M., Drozdová P., ?evčíková J. OKH, FN Plzeň

D-dimer je významný plazmatický protein, který je během fibrinolytického procesu uvolňován do cirkulace. Proteolytická degradace zesíťovaného fibrinu plasminem představuje ochranný mechanismus namířený proti tromboze tím, ?e obnovuje průtok krve v ?ilách po odstranění usazenin fibrinu. Molekula D-dimeru se skládá ze dvou D-domén z přilehlých fibrinových jednotek, propojených kovalentní glutamil-lysilovou vazbou mezi jejich g - řetězci. Právě tato kovalentní vazba ve struktuře d-dimeru způsobuje jeho odolnost proti ?těpení plasminem. Molekulová hmotnost D-dimeru je 182 000 daltonů, biologický poločas molekuly je 4 - 6 hodin in vivo.
V krevním řeči?ti jsou normálně přítomny obvykle nedetekovatelné úrovně D-dimeru. Av?ak při určitých klinických stavech, např. po trombotické události, při DIC, malignitách, infekcích, zánětlivých chorobách, po operacích a v těhotenství, se objevuje zvý?ení hladiny D-dimeru v cirkulaci. Vzhledem k tomu má test na D-dimery malou specifitu a nízkou pozitivní prediktivní hodnotu, ale je v?ak velmi citlivý a má vysokou negativní prediktivní hodnotu v diagnose ?ilního tromboembolismu. Jednou z mo?ností vyu?ití kvantitativního stanovení D-dimeru je proto potenciální vyloučení diagnosy ?ilní tromboembolie neinvazivní metodou. Metody detekce D-dimerů jsou zalo?eny na monoklonálních protilátkách, které rozli?ují epitopy na D-dimerových fragmentech. Určité protilátky pou?ité v komerčních testech v?ak mohou kři?ně reagovat s fibrinogenem a jeho deriváty, co? mů?e vést k fale?ně vysokým úrovním D-dimerů a to tedy znamená, ?e různé D-dimerové testy budou mít nestejné rozsahy normálů a odli?ně definované abnormální výsledky testů. Proto pochopení konstrukce testu a specifity protilátky je důle?ité při interpretaci výsledků a porovnávání koncentrací D-dimerů získanými odli?nými metodami. Přesnost klinického pou?ití D-dimerových testů závisí na dvou hlavních charakteristikách monoklonální protilátky pou?ité v testu. Jedná se o fibrinovou specifitu a senzitivitu dané monoklonální protilátky.Nejlep?ích výsledků tedy mů?e být dosa?eno za současného pou?ití monoklonální protilátky s vysokou afinitou k D-dimeru a minimální kří?ovou reakcí s fibrinogenem a jeho deriváty.
Cílem této práce bylo porovnat 3 principielně odli?né metody stanovení D-dimerů z hlediska senzitivity, specifity, negativní prediktivní hodnoty a pozitivní prediktivní hodnoty na souboru pacientů s příznaky ?ilní tromboembolie ( VTE). 140 pacientům (77mu?ům a 63 ?enám) ve věku od 20 do 71 let byla kvantitativně změřena koncentrace D-dimerů v plazmě latexaglutinační metodou a tzv. rychlou ELISOU. Zároveň v?em těmto pacientům byl orientačně stanoven semikvantitativní latexový test. 78 náhodně vybraným pacientům byla hladina D-dimerů stanovena s vyu?itím konvenční ELISY, která je pova?ována za referenční standard.U v?ech testovaných metod jsme zároveň ověřili firmou doporučované cutoff pou?itých reagencií.
Stručná charakteristika testovaných reagencií:
1. Auto Dimertest Micro ( firma Agen), latexový aglutinační kvantitativní test vyu?ívající vysoce specifickou D-dimer monoklonální protilátku DD - 3B6/22 s turbidimetrickou detekcí precipitátu, cutoff doporučené firmou: 150ng/ml DD
2. Vidas D-dimer test ( firma bioMérieux), rychlá ELISA, imunoenzymatická metoda sendvičového typu vyu?ívající monoklonální protilátku P10B5E12 a P2C5A10 ve dvou krocích s konečnou fluorescenční detekcí, firemní cutoff: 500ng/ml FEU (fibrinogen ekvivalentní jednotky)
3. Dimertest EIA Gold ( firma Agen) pro kvantitativní stanovení D-dimerů v plazmě, který reprezentuje klasickou ELISU s vyu?itím specifické protilátky DD-3B/22, doporučené cutoff: 120ng/ml DD
4. ( Agen Dimertest, semikvantitativní latexový test pro stanovení D-dimerů s pou?itím monoklonální protilátky DD - 3B6/22, s cutoff 200ng/ml DD)
Z na?ich výsledků jednoznačně vyplývá, ?e nejvy??í senzitivity ( 100%) a nejvy??í negativní prediktivní hodnoty (100%) bylo shodně dosa?eno při pou?ití metod Vidas D-dimer a Dimertest EIA Gold. Z praktického hlediska v?ak zůstává pou?ití klasické ELISA metody omezené vzhledem k tomu, ?e je finančně náročná, pracná a výsledky nejsou dosa?itelné denně. Proto se nám jeví Vidas D-dimer test, který je časově podstatně méně náročný, jako nejvhodněj?í.